來(lái)源：寶創(chuàng)日期：2023-07-14(856)
人乳頭瘤病毒（HPV）是一種常見的性傳播病毒，主要感染皮膚和黏膜組織的上皮細(xì)胞，99%的宮頸癌與高危型HPV的持續(xù)感染有關(guān)。因此，HPV檢測(cè)也成為預(yù)防宮頸癌的必要手段。
目前市場(chǎng)上眾多的HPV檢測(cè)產(chǎn)品，各產(chǎn)品的檢測(cè)靶標(biāo)略有不同（例如 HPV DNA L1區(qū)、HPV DNA E6/E7區(qū)、HPV E6/E7 mRNA 和 HPV DNA全基因組）。在國(guó)內(nèi)外各種HPV檢測(cè)產(chǎn)品中，基于L1區(qū)檢測(cè)的試劑應(yīng)用最為廣泛，而且大多數(shù)HPV DNA L1區(qū)檢測(cè)產(chǎn)品都通過(guò)VALGENT評(píng)估（國(guó)際公認(rèn)的HPV檢測(cè)臨床驗(yàn)證方案）。市場(chǎng)上基于E6/E7區(qū)的試劑比較少見，因此兩種不同靶標(biāo)的試劑檢測(cè)性能比較也成為學(xué)術(shù)討論熱點(diǎn)之一。
人乳頭瘤病毒(HPV)基因組包含3個(gè)區(qū)域[1]：
①1個(gè)長(zhǎng)控制區(qū)（LCR），是一個(gè)非編碼區(qū)
②1個(gè)早期編碼區(qū)(6個(gè)基因，E1、E2、E4、E5、E6和E7)，其編碼的蛋白質(zhì)在功能上具有調(diào)節(jié)性，扮演與HPV基因組復(fù)制和轉(zhuǎn)錄相關(guān)的角色；
③1個(gè)晚期編碼區(qū)(2個(gè)基因，L1和L2)，其編碼的蛋白質(zhì)形成病毒傳播和擴(kuò)散所需的病毒衣殼。
圖1 HPV16基因組
晚期基因L1
HPV晚期基因 L1片段在不同的HPV基因型中高度保守，這是HPV DNA分型PCR檢測(cè)技術(shù)多以L1區(qū)為靶標(biāo)的原因之一，已經(jīng)被廣泛用于宮頸篩查，對(duì)宮頸病變CIN2+的檢測(cè)具有高靈敏度[2]。但有研究認(rèn)為HPV DNA與人體基因的整合會(huì)導(dǎo)致L1基因的丟失，從而降低檢測(cè)HPV的靈敏度，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。但這個(gè)觀點(diǎn)缺乏明確且權(quán)威的證據(jù)。
早期基因E6/E7
HPV早期基因E6和E7編碼兩致癌蛋白，是高危型HPV導(dǎo)致宮頸癌的主要原因。有研究表示，相較于L1區(qū)的HPV檢測(cè)，使用早期基因E6/E7區(qū)擴(kuò)增可能對(duì)高級(jí)別病變和相關(guān)癌癥的HPV檢測(cè)更敏感。但是，基于E6/E7區(qū) DNA的檢測(cè)是否能夠更好地檢測(cè)癌癥和高級(jí)別病變中的HPV感染是基于相對(duì)有限的研究數(shù)據(jù)的，并沒有經(jīng)過(guò)權(quán)威認(rèn)證。
【文獻(xiàn)分享】L1區(qū)和E6/E7區(qū)高危HPV DNA試劑的檢測(cè)性能一致性
2022年在《Journal of Clinical Pathology》發(fā)表了《比較基于L1區(qū)和E6/E7區(qū)的高危型HPV檢測(cè)方法在在宮頸癌、口咽癌和陰莖癌中的一致性》[3]。研究中分別采用2種HPV DNA L1區(qū)檢測(cè)試劑和2種E6/E7區(qū)檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的比較，結(jié)果顯示兩種靶區(qū)域的檢測(cè)試劑在宮頸癌、口咽癌和陰莖癌中檢測(cè)HR-HPV時(shí)，具有高度的一致性，均可用于HPV感染的檢測(cè)。
圖2 研究使用4種試劑兩兩進(jìn)行檢測(cè)性能比較
表1所示：
·在HR-HPV檢測(cè)結(jié)果的一致性分析中，所有FFPE樣本檢測(cè)一致性為93%-98%。kappa統(tǒng)計(jì)表明，F(xiàn)FPE的陰莖癌樣本檢測(cè)具有幾乎完全一致的一致性(0.93)，其他樣本檢測(cè)均具有高度的一致性(0.63-0.78)。在LBC的CIN3樣本檢測(cè)中觀察到最高水平的檢測(cè)一致性(100%)。
·在HPV16檢測(cè)結(jié)果的一致性分析中，所有樣本類型的檢測(cè)一致性超過(guò)90%。kappa統(tǒng)計(jì)表明，LBC的宮頸癌樣本檢測(cè)具有高度的一致性(0.79)，對(duì)于其他樣品類型具有幾乎完全的一致性(0.83-0.95)。
表1 Xpert和RealTime檢測(cè)的HR-HPV和HPV16檢測(cè)結(jié)果的一致性分析
注:顏色圖例：深綠色（1.00≥K≥0.80）：幾乎完全一致；淺綠色（0.80≥K≥0.60）：高度一致。
表2所示：
·在HR-HPV檢測(cè)結(jié)果的一致性分析中，兩種基因分型檢測(cè)對(duì)于HR-HPV類型的所有樣本的一致性均很高，在FFPE的口咽癌樣本和與CIN3相關(guān)的LBC樣本中觀察到100%的最高檢測(cè)一致性水平。kappa統(tǒng)計(jì)表明， FFPE的CIN3樣本檢測(cè)具有高度的一致性(0.78)，F(xiàn)FPE的宮頸癌、陰莖癌和口咽癌樣本具有幾乎完全的一致性(0.88-1)。
·在HPV16檢測(cè)結(jié)果的一致性分析中，所有樣本類型的檢測(cè)一致性超過(guò)90%。kappa統(tǒng)計(jì)表明， FFPE的CIN3樣本以及全部宮頸癌樣本檢測(cè)具有高度的一致性(0.75-0.79)，口咽癌和陰莖癌樣本以及LBC的CIN3樣本檢測(cè)具有幾乎完全的一致性(0.90-1)。
表2 Euroarray和Optiplex 全分型檢測(cè)的HR-HPV和HPV16檢測(cè)結(jié)果的一致性分析
注:顏色圖例：深綠色（1.00≥K≥0.80）：幾乎完全一致；淺綠色（0.80≥K≥0.60）：高度一致。
綜上，
1.對(duì)于HR-HPV，各兩種檢測(cè)方法在陰陽(yáng)性檢出率和基因分型結(jié)果之間的符合率分別超過(guò)88%和96%。對(duì)于HPV16型，檢測(cè)符合率均超過(guò)90%。
2.Kappa統(tǒng)計(jì)顯示，HR-HPV和HPV16型在陰陽(yáng)性檢出和基因分型結(jié)果之間的各兩種檢測(cè)方法均具有有高度至幾乎完全的一致性。
基于靶向L1區(qū)的Real Time和Optiplex HPV檢測(cè)方法與靶向E6/E7區(qū)的EuroArray和Xpert HPV檢測(cè)方法進(jìn)行平行比較，在檢測(cè)CIN3、宮頸癌、口咽癌和陰莖癌中HR-HPV DNA時(shí)的檢驗(yàn)性能相似。
因此，靶向L1區(qū)和E6/E7區(qū)DNA的不同試劑的檢測(cè)性能相似，結(jié)果有高度的一致性，均可為相關(guān)疾病提供有價(jià)值的HR-HPV結(jié)果信息，用于宮頸癌的預(yù)防和控制。
寶創(chuàng)學(xué)術(shù)小貼士：
不同方法學(xué)的HPV檢測(cè)產(chǎn)品在檢測(cè)結(jié)果中存在一定程度的差異難以避免。造成差異的原因有很多，可能由檢測(cè)方法學(xué)、擴(kuò)增子大小和目標(biāo)HPV類型等的差異引起。當(dāng)前研究顯示，靶向L1區(qū)試劑的檢測(cè)性能與靶向E6/E7區(qū)試劑保持一致，沒有高下之分。
寶創(chuàng)生物HPV試劑的實(shí)測(cè)性能表現(xiàn)
各型別的陽(yáng)性符合率、陰性符合率以及總符合率都超過(guò)90%，而且Kappa值均大于0.8；
與導(dǎo)流雜交法對(duì)比
經(jīng)測(cè)序金標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)后，與臨床真實(shí)感染的情況相結(jié)合，總符合率為98.7%；
與流式熒光雜交法對(duì)比
檢測(cè)結(jié)果的符合率為96%；
符合率為91.67%， Kappa 檢驗(yàn)一致性較好；
寶創(chuàng)生物HPV檢測(cè)的全系列解決方案
[1]Kajitani N, Schwartz S. The role of RNA-binding proteins in the processing of mRNAs produced by carcinogenic papillomaviruses. Semin Cancer Biol. 2022 Feb 16:S1044-579X(22)00042-6. doi: 10.1016/j.semcancer.2022.02.014. Epub ahead of print. PMID: 35181475.
[2]Arbyn M, et al. Which high-risk HPV assays fulfil criteria for use in primary cervical cancer screening? Clin Microbiol Infect 2015;21:817–26.
[3]Alcaniz Boada E et al. Agreement between L1 and E6/E7-based assays for detection of high-risk HPV in cervical, oropharyngeal and penile cancers. J Clin Pathol. 2022 Feb 8:jclinpath-2021-208054. doi: 10.1136/jclinpath-2021-208054. Epub ahead of print. PMID: 35135864.
